细胞外囊泡（EVs）是由细胞自然释放的小型结构，与磷脂双分子层组成。这些囊泡存在于各种体液中，例如血液和尿液。EVs的特性，如细胞来源、浓度、成分和功能，常与特定疾病相关。因此，科研人员正在研究将EVs作为生物标志物，以用于癌症、心血管疾病等疾病的检测。然而，要实现这一目标，亟需建立可靠且可重复的EVs测量方法。目前，EVs生物标志物的研究面临主要挑战，尤其是不同检测单位和设备之间测量结果的不可比性，这严重制约了多中心研究的开展。多中心研究是临床生物标志物研究的基础。

为提高数据的可比性，我们开发了一种新型的参考材料和参考程序，以模拟EVs的物理特性。这些新型材料和程序的验证需要生物测试样品。我们成功研发了一种人血浆EVs测试样品（PEVTES），该样品不仅与血浆中的亚细胞颗粒相似，而且具备现成使用、与流式细胞仪兼容及良好的稳定性。

在制作PEVTES的方法中，我们采用了三名空腹供体的血浆进行样品准备。首先，利用血小板特异性（CD61）和红细胞特异性（CD235a）抗原对EVs进行免疫荧光染色。随后，通过大小排斥层析法从血浆中分离出染色后的EVs，以降低可溶性蛋白、脂蛋白和未结合试剂的浓度。分离后使用0.8μm孔径的聚碳酸酯过滤器去除残余血小板。在此基础上，PEVTES使用冷冻保存剂、二甲亚砜（DMSO）、甘油或海藻糖进行稀释，并在-80℃下保存长达12个月。

为了评估PEVTES的稳定性，我们在冷冻前及保存1、3、6和12个月后，通过流式细胞仪测量染色的EVs浓度，并对其流速、荧光信号和光散射信号进行了校准。不同步骤的流程包括人血浆的收集和处理、染色程序、尺寸排除层析以及保存PEVTES。

在对PEVTES进行稳定性检测时，结果显示，在DMSO中保存12个月的CD61+ EVs测量浓度下降了33%；而在甘油和海藻糖介质中分别增加了9%和6%。同样，对于CD235a+ EVs的浓度，在保存条件下，相比新鲜材料分别下降约70%、23%和15%。针对乳酸粘附素+ EV，浓度在DMSO、甘油和海藻糖中分别下降23%、28%和19%。

综合评估得出结论，PEVTES不仅与血浆中的亚细胞颗粒特征相似，而且使用简便、与纳米流式细胞术兼容且具有良好稳定性。因此，开发的PEVTES成为验证新参考材料及程序的理想候选对象。对于生物医疗领域而言，这种新技术将在分析EVs的过程中，提供可靠的测量工具，助力于进一步的基础研究及转化应用。

在此，我们也鼓励大家关注[俄罗斯专享会284]，获取最新的EVs相关研究动态与产品信息。您可以通过我们的官方网站了解更多详情，或咨询我们的客服团队。感谢您的支持！