### 实验步骤：细菌培养及监测

#### 一、过夜培养

1. 将5ml预热的液体培养基移入一无菌的16mm或18mm管中。

2. 使用接种环挑取一个单独的菌落，浸入培养液中，并轻轻振动接种环，以便将待接种的细菌均匀分散于培养液中。

3. 盖好试管，在摇床或转鼓式培养设备上以60r/min的速度，于37°C下培养至饱和状态（浓度约在1X10⁹~2X10⁹细胞/ml，培养时间约6小时）。

#### 二、大体积培养

1. 在一无菌的Erlenmeyer或baffle瓶中，用新鲜预热的培养液按1:100比例稀释过夜培养物，烧瓶的体积应至少是培养液体积的5倍。如果不进行摇动培养，所需烧瓶体积应比培养液体积大20倍，以确保有足够的通气。

2. 在37°C下剧烈摇动培养（约300r/min）。

#### 三、利用计数板监测生长情况

1. 用干净的盖玻片覆盖一片清洁的计数玻片（或血球计）。

2. 小心地在盖玻片边缘滴入一小滴培养液，使其扩散到盖玻片下方。

3. 在相差显微镜下以400倍放大观察，并按每个小方块中所见的细菌数量计算，约合2X10⁷细胞/ml的浓度。

#### 四、利用分光光度计监测生长情况

由于仪器的差异，使用分光光度计前应以已知浓度的培养液进行校准。

1. 测定OD600值。为了获得准确读数，应将培养液稀释至OD600＜1。

2. 按每0.1 OD值约相当于10⁸细胞/ml来计算细菌浓度。

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