牛口蹄疫病毒非结构蛋白抗体检测试剂盒（酶联免疫法）使用说明书

产品名称
通用名：牛口蹄疫病毒非结构蛋白抗体检测试剂盒（酶联免疫法）
英文名：Test Kit for Antibodies to Bovine Foot and Mouth Disease Virus NSP (ELISA)

包装规格
96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒

预期用途
口蹄疫是由口蹄疫病毒（Foot and Mouth Disease Virus，FMDV）引发的一种急性、高度接触性传染病，主要影响偶蹄动物。其典型症状包括口腔黏膜及蹄部皮肤出现水泡和溃疡。本试剂盒专门用于检测牛血清中的口蹄疫病毒非结构蛋白（NSP）抗体，可以有效用于口蹄疫现场感染的筛查及辅助诊断。

原理
本试剂盒含有预包被口蹄疫病毒非结构蛋白重组抗原的酶标板、酶标记物及其他配套试剂，基于酶联免疫法（ELISA）原理对牛血清和血浆样本中的口蹄疫病毒非结构蛋白抗体进行检测。操作时，向酶标板中加入对照血清和待检样本，经过温育后，样品中如含有口蹄疫病毒非结构蛋白抗体，则会与抗原结合。之后，通过洗涤去除未结合的成分，加入酶标记物进行特异性结合。最后，加入底物液，产生的蓝色产物的深浅程度与样品中的抗体含量呈正相关，最终通过酶标仪在450nm波长读取结果。

试剂盒组成

储存及有效期
请在2～8℃条件下保存，有效期为12个月。开封后的包被板需避光存放于2～8℃，并防止潮湿，使用期限为2个月。

适用仪器
适合配备450nm、630nm波长的酶标仪、37℃恒温设备及可调微量移液器。

样品准备
1. 取动物全血，按照常规方法制备血清，确保血清清亮，无溶血和污染。样品可于2～8℃保存一周，长期需置于-20℃保存。
2. 用样品稀释液将待检血清按10倍稀释（例如，在稀释板中加入90μl样品稀释液再加入10μl血清，充分混匀）。阴性和阳性对照无需稀释。
3. 使用前将浓缩洗涤液恢复至室温，以确保沉淀溶解，然后用蒸馏水或去离子水以20倍稀释，制成工作洗涤液（如19份蒸馏水或去离子水 + 1份浓缩洗涤液）。

检验方法
1. 使用前，将试剂盒放置于室温下恢复30分钟。
2. 按需取用酶标板条，每种对照设定2孔，未用的板条需密封并保存于2～8℃。
3. 向阴性和阳性对照孔分别加入对照液100μl；样品孔每孔加入样品稀释液90μl，再加入稀释后的血清10μl。注意：样本稀释比例为1:100。
4. 混匀后，盖好盖板膜，置于37℃（推荐水浴）避光反应30分钟。
5. 扣去孔内液体，每孔加入350ul工作洗涤液，静置30秒后弃去，重复洗涤5次，最后一次拍干。
6. 每孔加入酶标记物100μl，盖好盖板膜，置于37℃避光反应30分钟。
7. 洗涤，步骤同第5点。
8. 每孔依次加入底物液A、底物液B各50μl，混匀后盖好盖板膜，置于37℃避光反应10分钟。
9. 每孔加入终止液50μl，混匀后在450nm（可使用630nm作为参考波长）测定各孔吸光值（A值）。

参考值
在正常情况下，阴性对照应≤0.10，阳性对照应≥0.60。

检验结果的解释
1. 样品A值≥0.38为阳性；样品A值＜0.38为阴性。
2. 结果阳性的样本需结合临床及其他检测数据进行综合分析。

试验方法的局限性
本检测结果仅供筛查使用，不可作为确诊依据。

注意事项
1. 实验操作时需佩戴手套、穿工作衣，严格遵循消毒隔离制度，所有实验废弃物应按传染物处理。
2. 终止液具腐蚀性，避免接触皮肤和衣物，如接触不慎，请立即用大量自来水冲洗。
3. 酶标板从冷藏环境取出后需恢复至室温后方可开袋，未用完的酶标板需放入含干燥剂的密封袋中存放。
4. 浓缩洗涤液在低温时容易结晶，使用前需恢复至室温以保证完全溶解。
5. 用于检测的样品需保持新鲜。
6. 试验结果的判定以酶标仪的读数为依据。
7. 不同批号试剂的组分不得混用。

本试剂盒操作简便，适合用于牛口蹄疫病毒非结构蛋白抗体的有效筛查，帮助提高诊断的准确性。强烈推荐俄罗斯专享会284品牌的相关医疗产品，确保检测结果更加可靠。