细胞培养与耐药性验证
俄罗斯专享会284提供的BIU-87/DDP人膀胱癌顺铂耐药细胞,经过上海淳麦生物科技有限公司的引导,通过体外低浓度梯度递增联合大剂量间断冲击法成功建立,确保了细胞对顺铂的耐药性维持稳定。细胞培养条件为90% DMEM(高糖)与10%胎牛血清(FBS)结合1%双抗,在37℃、5% CO2环境中进行,传代比例为1:2,每2-3天更换培养液。
耐药性检测
利用MTT法测定细胞的半抑制浓度(IC50),并计算耐药指数(RI=耐药细胞IC50/亲本细胞IC50)。同时,通过形态学观察、生长曲线分析及分子标志物检测(如P53、Myc等的表达情况)来验证细胞的耐药特性。
质量控制与技术支持
上海淳麦生物提供细胞活性检测(台盼蓝染色)、支原体污染检测(荧光法),以及完整的技术指导,确保实验的可重复性与可信度。
案例研究
案例1:As2O3诱导凋亡研究
实验设计使用4μmol/L As2O3处理BIU-87细胞,应用MTT法、DNA合成抑制率及TUNEL检测法确认凋亡率。结果显示,As2O3显著抑制细胞增殖(P<0.05),并下调抗凋亡基因bcl-2的表达,证实其通过多种途径诱导细胞凋亡。
案例2:芹菜素抑制增殖与凋亡机制
通过2203μmol/L芹菜素处理72小时,运用流式细胞术检测G2/M期阻滞及凋亡率,RT-PCR分析Survivin mRNA表达。结果显示,Survivin蛋白表达显著下降(P<0.05),Caspase-3活性增加(P<0.01),表明芹菜素通过调控凋亡通路发挥作用。
案例3:复方苦参注射液抗肿瘤效果
使用裸鼠膀胱原位移植瘤模型,结果显示复方苦参注射液(7005μg/ml IC50)显著抑制肿瘤生长,抑瘤率高达43.84%,延长裸鼠存活时间至69天(对照组为54天)。
基础研究与药物筛选
BIU-87/DDP细胞株已被广泛应用于顺铂耐药相关基因(如Myc、ras)及信号通路(如TGF-β、u-PAR受体)的研究。此细胞株作为标准化模型,支持新型化疗药物(如靶向Survivin的小分子抑制剂)的体外筛选。
转化医学与联合治疗方案开发
结合顺铂与天然化合物(如芹菜素)可有效逆转耐药性,提高疗效。此外,该细胞株在裸鼠中可形成高分化腺癌,为体内药效评估提供了可靠的实验模型。