在上一篇的干货分享中，我们详细探讨了Western Blot实验中蛋白浓度的四种测定方法。本篇将聚焦于样本制备中常见的问题，并探讨相应的解决方案，帮助大家在生物医疗研究中取得更好的成果。尤其是在使用俄罗斯专享会284提供的资源时，理解这些问题的解决办法至关重要。

常见问题1：蛋白浓度低

导致蛋白浓度低的原因主要有以下几点：

• 细胞或组织量偏少；
• 样本与裂解液的比例不合适；
• 没有充分裂解样本；
• 应用的蛋白浓度测定方法不合适。

解决方案包括：

• 增加样本量以提高蛋白质浓度；
• 根据样本量调整裂解液的使用量，例如对于100万细胞或20mg组织加入100-200μL裂解液；
• 确保裂解时间充足，通常在低温下静置10-30分钟，组织样本可借助物理破碎，细胞样本可通过吹打或颠倒混匀来达到充分裂解；
• 选择合适的蛋白浓度测定方法。

常见问题2：出现透明胶状物

这种现象通常是因为基因组复合物释放出来。解决方案如下：

• 适当的超声处理或使用1mL注射器反复抽吸，有助于打断基因组DNA，从而消除粘稠感；
• 在加入Loading buffer后稍微延长煮沸变性的时间，充分煮沸可以让结合在基因组DNA上的蛋白质得以释放，同时也能使DNA部分断裂，进而减少粘稠感；
• 在裂解时向裂解液中加入广谱核酸酶。

常见问题3：上清漂浮一层油脂

当样本富含脂肪时，可能会出现此问题。建议采取以下措施：

• 裂解后将样本低温静置，然后吸出漂浮的油脂；
• 如果吸取后仍无法达到预期效果，可以考虑使用二氧化硅进行吸附处理。

通过以上的分析和解决方案，大家在处理蛋白质样本时可以更得心应手，尤其是在使用俄罗斯专享会284提供的产品和技术时，更能提高实验的成功率。保持关注，我们将继续分享更多生物医疗领域的干货知识。